Mam ogromny problem! Po elektroogniskowaniu, prowadząc rozdziały SDS- PAGE białka pozostają w górnej części żelu analitycznego.
Rozdziały prowadzone są na 11% żelach po uprzednim ogniskowaniu. Barwnik wędruje w dół żelu. Zmieniono wszystkie odczynniki, pH buforów jest ok. Sprawdzono 3 zasilacze i 3 sprzęty do rozdziału (sprzęt na żele 20x20, 20x18, i małe żele) - na wszystkich taki sam rozdział. Bufor elektrodowy jest ok. Rozdział puszczany jest przy stałym natężeniu prądu, ale bardzo szybko rosną V.
Odczynniki zostały zmienione, puszczano na odczynnikach z innego lab.
Być może jest to problem ogniskowania, ale mimo, że białka nie są rozdzielone wg. masy, wydaje mi się że ogniskowanie jest poprawne.. Ekstrakcja białek do 2D z mocznikiem, tiomocznikiem, Chapsem. Może ktoś miał taki problem.. czekam na jakieś wskazówki
Zainteresowanych szkoleniami z bioinformatyki zachęcamy do wpisania się do formularza:
Biotechnologia w rolnictwie
