Bufor do lizy tkanek

Bufor przeznaczony jest do lizy enzymatycznej ścian komórkowych tkanek (trawienie enzymatyczne). Bufor do trawienia enzymatycznego używany jest w początkowym etapie izolacji materiału genetycznego (DNA lub RNA) ze struktur komórkowych. Aby zwiększyć efektywność procesu izolacji, można dodać do roztworu lizującego (mieszaniny reakcyjnej) DTT (Dithiothreitol). DTT m.in. redukuje mostki disiarczkowe jak również stabilizuje działanie enzymów.

Przygotowanie buforu do lizy tkanek

– przygotowanie roztworu o końcowej objętości 40 ml.
Do objętości 33,3 ml wody destylowanej należy dodać:
4 ml (1 M, pH 8,0-8,5) Tris-Cl – końcowa koncentracja 100 mM;
1,6 ml (5 M) NaCl – końcowa koncentracja 200 mM;
0,8 ml (10%, rozpuszczonego w sterylnej wodzie) SDS – końcowa koncentracja 0,2%;
0,4 ml (0,5 M) EDTA – końcowa koncentracja 5 mM;
4 mg Proteinazy K (rekombinowana, klasa PCR) – końcowa koncentracja 100 µg/ml.

Długość przechowywania buforu do lizy tkanek wynosi około 12 miesięcy, w temperaturze 4 stopni Celsjusza.